TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

Hurtig oprensning af DNA fra forskellige materialer til PCR -detektion.

TIANcombi DNA Lyse & Det PCR -kittet vedtager et unikt emballagedesign, der indeholder alle reagenser til hurtig genomisk DNA -forberedelse og PCR -amplifikation. Det kan anvendes til et-trins genom-DNA-oprensning fra forskellige prøver (plantevæv, frø, dyrevæv, blod, gær og bakterier) og den efterfølgende PCR-amplifikation og detektion. Fjernelse af protein, RNA og andre sekundære metabolitter, ekstraktion af organisk opløsningsmiddel samt ethanoludfældningstrinnene er ikke nødvendige i hele rensningsprocessen, hvilket gør operationen enkel og hurtig. Produktkvaliteten er stabil og pålidelig.

2 × Det PCR MasterMix leveret af dette kit er et yderst kompatibelt PCR -reagens, der effektivt og specifikt kan forstærke DNA uden behov for fjernelse af urenheder såsom proteiner. Dette reagens indeholder Taq DNA -polymerase, dNTP'er, MgCl2, buffer samt forstærker, optimizer og stabilisator til PCR -reaktion. Anvendelse af reagenset gør PCR -reaktion hurtig, enkel, følsom, specifik og stabil. Derfor er dette kit især velegnet til screening med høj kapacitet.

Kat. Ingen Pakningsstørrelse
4992527 20 µl × 50 rxn
4992528 20 µl × 200 rxn

 

 


Produktdetaljer

Eksperimentelt eksempel

Ofte stillede spørgsmål

Produktmærker

Funktioner

■ Enkelt og hurtigt: DNA fra forskellige væv kan ekstraheres på 5 minutter uden behov for flydende nitrogenslibning.
■ Bred anvendelse: Gælder planteblade, frø, dyrevæv, blodprøver (frisk blod, antikoagulation, blodpropper, tørrede blodpletter osv.), Gær og bakterier.
■ Stærk kompatibilitet: PCR -reagenset er velegnet til amplifikation af DNA ekstraheret fra forskellige prøvekilder.

Ansøgninger

■ Gendetektering: Ideel valg til genpåvisning i stor skala.

Vigtige bemærkninger

■ For prøver, der indeholder et højt indhold af phenoler, f.eks. Bomuldsblade, bør prøveindgangsmængden strengt være mindre end 0,4 mg, ellers påvirkes PCR -reaktionen.

Alle produkterne kan tilpasses til ODM/OEM. For detaljer,klik venligst på Tilpasset service (ODM/OEM)


  • Tidligere:
  • Næste:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Exampl DNA blev ekstraheret fra henholdsvis 5 mg blade og frø af majs, hvede, ris, sojabønne og bomuld. DNA'et blev amplificeret ved PCR under anvendelse af specifikke primere. 6 pi DNA fra de samlede 20 pi eluenter blev fyldt pr. Bane.
    1: Positivt kontrolgenom; 2: efterlad prøver; 3: frøprøver; 4: NTC; 5: D2000 primere
    Experimental Example M: TIANGEN Marker D2000; 1: Positiv kontrol;
    2-7: Antallet af tørrede blodpletter på filterpapiret er henholdsvis 1-6; 8: Negativ kontrol.
    3 mm stansen blev brugt til at tage de tørrede blodpletter fra filterpapiret som materiale til ekstraktionstesten.
    6 pi DNA fra de samlede 20 pi eluenter blev fyldt pr. Bane.
    Experimental Exampl M: TIANGEN Marker D2000; 1: Positiv kontrol (genomisk DNA blev anvendt som skabelon); 2-7: Mængden af ​​tilsat blod er henholdsvis 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl og 60 μl; 8-13: Mængden af ​​tilsat blod er henholdsvis 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl og 60 μl; 14: NTC.
    6 pi DNA fra de samlede 20 pi eluenter blev påsat agarosegel.
    Q: Ingen forstærkningsbånd

    A-1 skabelon

    ■ Skabelonen indeholder protein -urenheder eller Taq -hæmmere osv. —— Rens DNA -skabelon, fjern protein -urenheder eller ekstraher skabelon -DNA med oprensningssæt.

    ■ Denatureringen af ​​skabelonen er ikke fuldført —— Forøget denatureringstemperatur passende og forlæng denatureringstiden.

    ■ Nedbrydning af skabeloner —— Forbered skabelonen igen.

    A-2 Primer

    ■ Dårlig kvalitet af primere —— Re-syntetisere primeren.

    ■ Nedbrydning af primer —— Alikvoter primerne med høj koncentration i lille volumen til konservering. Undgå flere frysninger og optøninger eller langtids 4 ° C kryokonserveret.

    ■ Ukorrekt udformning af primere (f.eks. Primerlængde ikke tilstrækkelig, dimer dannet mellem primere osv.) -Rediger primere (undgå dannelse af primer -dimer og sekundær struktur)

    A-3 mg2+koncentration

    ■ Mg2+ koncentrationen er for lav —— Korrekt stigning Mg2+ koncentration: Optimer Mg2+ koncentration ved en række reaktioner fra 1 mM til 3 mM med et interval på 0,5 mM for at bestemme den optimale Mg2+ koncentration for hver skabelon og primer.

    A-4 Udglødningstemperatur

    ■ Den høje udglødningstemperatur påvirker bindingen af ​​primer og skabelon. —— Reducer udglødningstemperaturen, og optimer tilstanden med en gradient på 2 ° C.

    A-5 Forlængelsestid

    ■ Kort forlængelsestid —— Forlæng forlængelsestiden.

    Q: Falsk positiv

    Fænomener: Negative prøver viser også målsekvensbåndene.

    A-1 Forurening af PCR

    ■ Krydsforurening af målsekvens eller amplifikationsprodukter —— Forsøg ikke at pipette prøven, der indeholder målsekvensen, i den negative prøve eller spilde dem ud af centrifugerøret. Reagenserne eller udstyret skal autoklaveres for at fjerne eksisterende nukleinsyrer, og forekomsten af ​​kontaminering bør bestemmes gennem negative kontrolforsøg.

    ■ Kontaminering af reagenser —— Alikvoter reagenserne, og opbevar dem ved lav temperatur.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ koncentrationen er for lav —— Korrekt stigning Mg2+ koncentration: Optimer Mg2+ koncentration ved en række reaktioner fra 1 mM til 3 mM med et interval på 0,5 mM for at bestemme den optimale Mg2+ koncentration for hver skabelon og primer.

    ■ Forkert primerdesign, og målsekvensen har homologi med ikke-målsekvensen. —— Re-design primere.

    Sp: Ikke-specifik forstærkning

    Fænomener: PCR-amplifikationsbåndene er uforenelige med den forventede størrelse, enten store eller små, eller nogle gange forekommer både specifikke amplifikationsbånd og uspecifikke amplifikationsbånd.

    A-1 Primer

    ■ Dårlig primerspecificitet

    —— Re-design primer.

    ■ Primer -koncentrationen er for høj —— Forøg korrekt denatureringstemperaturen og forlæng denatureringstiden.

    A-2 mg2+ koncentration

    ■ Mg2+ koncentrationen er for høj —— Reducer Mg2+ -koncentrationen korrekt: Optimer Mg2+ koncentration ved en række reaktioner fra 1 mM til 3 mM med et interval på 0,5 mM for at bestemme den optimale Mg2+ koncentration for hver skabelon og primer.

    A-3 termostabil polymerase

    ■ Overdreven enzymmængde —— Reducer enzymmængden passende med intervaller på 0,5 U.

    A-4 Udglødningstemperatur

    ■ Glødningstemperaturen er for lav —— Hæv glødetemperaturen passende, eller anvend to-trins glødemetoden

    A-5 PCR-cyklusser

    ■ For mange PCR -cykler —— Reducer antallet af PCR -cyklusser.

    Q: Patchy eller smear bands

    A-1 Primer——Dårlig specificitet —— Gendesign primeren, ændr primerens position og længde for at forbedre dens specificitet; eller udføre indlejret PCR.

    A-2 Skabelon-DNA

    ——Skabelonen er ikke ren —— Rens skabelonen, eller udtræk DNA med rensningssæt.

    A-3 mg2+ koncentration

    ——Mg2+ koncentrationen er for høj —— Reducer Mg korrekt2+ koncentration: Optimer Mg2+ koncentration ved en række reaktioner fra 1 mM til 3 mM med et interval på 0,5 mM for at bestemme den optimale Mg2+ koncentration for hver skabelon og primer.

    A-4 dNTP

    —— Koncentrationen af ​​dNTP’er er for høj —— Reducer koncentrationen af ​​dNTP på passende vis

    A-5 Udglødningstemperatur

    ——For lav udglødningstemperatur —— Forøg passende udglødningstemperatur

    A-6 cykler

    ——For mange cykler ——Optimér cyklustallet

    Sp .: Hvor meget skabelon -DNA skal tilføjes i et 50 pi PCR -reaktionssystem?
    ytry
    Sp: Hvordan forstærkes lange fragmenter?

    Det første trin er at vælge den passende polymerase. Regelmæssig Taq-polymerase kan ikke korrekturlæses på grund af mangel på 3'-5 'exonukleaseaktivitet, og mismatch vil i høj grad reducere forlængelseseffektiviteten af ​​fragmenter. Derfor kan almindelig Taq -polymerase ikke effektivt amplificere målfragmenter større end 5 kb. Taq -polymerase med særlig modifikation eller anden højfidelitetspolymerase bør vælges for at forbedre forlængelseseffektivitet og opfylde behovene ved langfragmentforstærkning. Derudover kræver amplifikation af lange fragmenter også tilsvarende justering af primerdesign, denatureringstid, forlængelsestid, buffer-pH osv. Normalt kan primere med 18-24 bp føre til bedre udbytte. For at forhindre skabelonskade bør denatureringstiden ved 94 ° C reduceres til 30 sekunder eller mindre pr. Cyklus, og tiden til at stige temperaturen til 94 ° C før forstærkning bør være mindre end 1 min. Desuden kan indstilling af forlængelsestemperaturen til ca. 68 ° C og design af forlængelsestiden i henhold til hastigheden på 1 kb/min sikre effektiv forstærkning af lange fragmenter.

    Sp: Hvordan forbedres PCR's amplifikationsfidelitet?

    Fejlhastigheden ved PCR -amplifikation kan reduceres ved anvendelse af forskellige DNA -polymeraser med høj kvalitet. Blandt alle de Taq DNA -polymeraser, der er fundet indtil nu, har Pfu -enzym den laveste fejlrate og den højeste troværdighed (se vedhæftede tabel). Ud over enzymudvælgelse kan forskere yderligere reducere PCR -mutationshastighed ved at optimere reaktionsbetingelser, herunder optimering af buffersammensætning, koncentration af termostabil polymerase og optimering af PCR -cyklustal.

    Skriv din besked her og send den til os